Напишите нам
Ваше сообщение отправлено!
Напишите нам
Закрыть

Молекулярно-биологическая характеристика изолятов вируса эпидемической диареи свиней (ЭДС), выявленных в Украине

Молекулярно-биологическая характеристика изолятов вируса эпидемической диареи свиней (ЭДС), выявленных в Украине

МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА ЭПИДЕМИЧЕСКОЙ ДИАРЕИ СВИНЕЙ (ЭДС), ВЫЯВЛЕННЫХ В УКРАИНЕ

Анна Пастыря*1, Ирина Собко1, Дарья Бережная2, Алексей Нечипуренко1

1Центр Ветеринарной Диагностики, 2Киевский национальный университет им. Тараса Шевченко, Киев, Украина

Вирус эпидемической диареи свиней (ЭДС), представитель семейства Coronaviridae, вызывает сильный понос, рвоту и дегидратацию. Вирус ЭДС может инфицировать свиней любого возраста, однако самые высокие показатели смертности обычно наблюдаются у новорожденных поросят. Этот вирус впервые был обнаружен в Бельгии в 1971 году, и в течение следующих нескольких лет вирус ЭДС распространился по всей Европе. Считалось, что до 2013 года заболевание

ограничивалось азиатскими странами. Однако, позднее в том же году были сообщения о нескольких вспышках инфекции в США и Европе. Летом 2014 года вспышка была зарегистрирована и в Украине.

Цель исследования состояла в том, чтобы проанализировать молекулярные и биологические особенности изолятов вируса ЭДС, выявленных в Украине.

Материалы и методы: Вирусную РНК выделяли с использованием набора реактивов «MagVetTM» Universal Purification Kit. Обратную транскрипцию проводили с помощью коммерческого набора реагентов REVERTA-L (AmpliSens). Обнаружение вируса проводили с помощью нестед ОТ-ПЦР с использованием in-house праймеров. Секвенирование полноразмерного генома обнаруженного изолята вируса осуществляли в Британском Агентстве по контролю за здоровьем животных и растений (Karr, 2014). Полученную последовательность сравнивали с другими штаммами вируса ЭДС из США, Азии и Европы. Филогенетический анализ был проведен с помощью программы MEGA 6.0. Дерево было построено с использованием алгоритма "объединения соседей" (neighbour joining). Был проведен анализ тканей кишечника инфицированных свиней с целью исследования патоморфологических изменений, вызванных вирусом ЭДС. Материал ткани фиксировали в 10% забуференном растворе формалина и заливали в парафин. Образцы окрашивались гематоксилином и эозином.

Результаты: В период 2014-2015 гг. были исследованы 623 образца кишечника, фекалий и ректальных мазков от свиней с симптомами эпидемической диареи. Из них 125 образцов были положительными на вирус ЭДС. Наблюдались микроскопические кишечные поражения, такие как вакуолизация и некроз энтероцитов. Было отмечено прилипание апикальных частей ворсинок. Кроме того, была обнаружена инфильтрация лимфоцитов и макрофагов и кровоизлияние в собственной пластинке слизистой оболочки ворсинок и подслизистого слоя. Такие поражения могут быть вызваны бактериальной коинфекцией. Филогенетический анализ полного генома изолята вируса ЭДС, выявленного в Украине, показал наибольшее сходство со штаммами вируса ЭДС из США и Мексики (GenBank accession no. KJ645707.1, KJ645700.1, KJ645708.1, KG643697.1). Идентичность нуклеотида составляла 99,7%. Гомология нуклеотида с европейскими и азиатскими штаммами вируса ЭДС была значительно ниже.

Заключения: С момента вспышки ЭДС в Украине мы обнаружили 125 положительных образцов вируса ЭДС в патологическом материале с помощью нестед ОТ-ПЦР с использованием in-house праймеров. Были даны характеристики специфических гистологических изменений. Филогенетический анализ показал высокое сходство со штаммами из США и Мексики.

Литература: 1. A. Dastjerdi, J. Carr, R. J. Ellis, Porcine Epidemic Diarrhea Virus among Farmed Pigs, Ukraine Emerging Infectious Diseases (2015) Vol. 21, No. 12

2. Changhee Lee Porcine epidemic diarrhea virus: An emerging and reemerging epizootic swine virus // Virology Journal (2015).

3. Kim Y, Lee C. Porcine epidemic diarrhea virus induces caspase-independent apoptosis through activation of mitochondrial apoptosis-inducing factor // Virology. (2014).

4.Daesub Song, Bongkyun, Park Porcine epidemic diarrhea virus: a comprehensive review of molecular epidemiology, diagnosis, and vaccines // Virus Genes (2012).

5. Shirato K, Matsuyama S, Ujike M, Taguchi F. Role of proteases in the release of porcine epidemic diarrhea virus from infected cells // J Virol. (2011).

Алексей Нечипуренко
Алексей Нечипуренко
Заведующий лабораторией гистологии
Анна Пастыря
Анна Пастыря
Начальник відділу наукових досліджеть та розвитку
Ирина Собко
Ирина Собко
Директор ООО "Центр Ветеринарной Диагностики"